Produkter
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Detektiounskit fir 2019-nCoV
Erwaarte Benotzung
Dëse Kit gëtt fir d'qualitativ Noweis vum neie Coronavirus (2019-nCoV) mat Hëllef vu Halsabstricher, Nasopharyngealabstricher, Bronchoalveolarspülflëssegkeet a Sputum benotzt. D'Noweisresultat vun dësem Produkt ass nëmme fir klinesch Referenzzwecker a soll net als eenzege Beweis fir klinesch Diagnos a Behandlung benotzt ginn. Eng ëmfaassend Analyse vum Zoustand a Kombinatioun mat de klinesche Manifestatiounen vum Patient an anere Labortester gëtt recommandéiert.
Inspektiounsprinzip
De Kit baséiert op enger One-Step RT-PCR Technologie. Tatsächlech goufen d'ORF1ab- an d'N-Genen vum neie Coronavirus 2019 (2019-nCoV) als Zilregiounen fir d'Amplifikatioun ausgewielt. Spezifesch Primer a fluoreszent Sonden (N-Gensonden sinn mat FAM markéiert an ORF1ab-Sonden sinn mat HEX markéiert) sinn entwéckelt fir RNA vum neien Typ vum Coronavirus 2019 a Proben z'entdecken. De Kit enthält och en endogent internt Kontrolldetektiounssystem (intern Kontrollgensonde markéiert mat CY5) fir de Prozess vun der Probensammlung, der RNA an der PCR-Amplifikatioun ze iwwerwaachen, wouduerch falsch negativ Resultater reduzéiert ginn.
Haaptkomponenten
| Komponenten | Volumen(48T/Kit） |
| RT-PCR Reaktiounsléisung | 96µl |
| nCOV Primer TaqMan Probemixture (ORF1ab, N Gene, RNAseP Gene) | 864µl |
| Negativ Kontroll | 1500µl |
| nCOV Positiv Kontroll（l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Eege Reagenzien: RNA-Extraktioun oder Reinigungsreagenzien. Negativ/positiv Kontroll: Déi positiv Kontroll ass RNA, déi den Zilfragment enthält, während déi negativ Kontroll Nukleinsäurefräi Waasser ass. Wärend der Benotzung solle se un der Extraktioun deelhuelen a solle als infektiéis ugesi ginn. Si solle geméiss de jeeweilege Reglementer behandelt an entsuergt ginn.
Dat internt Referenzgen ass dat mënschlecht RnaseP-Gen.
Lagerbedingungen an Verfallsdatum
-20±5℃, vermeit widderholl Afréieren an Optauen méi wéi 5 Mol, gëlteg fir 6 Méint.
Uwendbar Instrument
Mat FAM / HEX / CY5 an anerem Multikanal-Fluoreszenz-PCR-Instrument.
Ufuerderunge fir d'Prouf
1. Zutreffend Probetypen: Halsabstäbchen, Nasopharyngealabstäbchen, Bronchoalveolarspülflëssegkeet, Sputum.
2. Proufensammlung (aseptesch Technik)
Pharynx-Tupfer: Wëscht d'Mandelen an d'hënnescht Pharynxwand mat zwou Tupfer gläichzäiteg of, da taucht de Kapp vum Tupfer an e Reagenzglieser mat der Proufléisung.
Sputum: Nodeems de Patient en déiwen Houscht huet, sammelt den gehusteten Sputum an engem Reagenzglieser mat Schraufverschluss, dat d'Proufléisung enthält; bronchoalveolar Spullflëssegkeet: Proufnahme vun Dokteren. 3. Lagerung an Transport vu Proben
Prouwe fir Virusisolatioun an RNA-Tester solle sou séier wéi méiglech getest ginn. Prouwe, déi bannent 24 Stonnen nogewise kënne ginn, kënnen bei 4°C gelagert ginn; déi, déi net bannent 24 Stonnen nogewise kënne ginn, kënnen bei 4°C gelagert ginn.
Stonnen solle bei -70℃ oder manner gelagert ginn (wann et keng Lagerkonditioun vun -70℃ gëtt, solle se
temporär bei engem Frigo vun -20 °C gelagert). Prouwe solle wärend dem Transport net ëmmer erëm afréieren an optauen. D'Prouwe solle sou séier wéi méiglech no der Sammlung an de Laboratoire geschéckt ginn. Wa Prouwe iwwer laang Strecken transportéiert musse ginn, ass d'Lagerung an Dréchenäis recommandéiert.
Testmethoden
1 Proufveraarbechtung an RNA-Extraktioun (Proufveraarbechtungsberäich)
Et ass recommandéiert, 200 μl flësseg Prouf fir d'RNA-Extraktioun ze huelen. Fir déi entspriechend Extraktiounsschrëtt, kuckt w.e.g. d'Instruktioune vun de kommerziellen RNA-Extraktiounskits. Souwuel déi negativ wéi och déi negativ
Kontrollen an dësem Kit waren an der Extraktioun involvéiert.
2 PCR-Reagensvirbereedung (Reagensvirbereedungsberäich)
2.1 Huelt all Komponenten aus dem Kit eraus, tau se op a vermëscht se bei Raumtemperatur. Zentrifugéiert e puer Sekonnen bei 8.000 rpm virum Gebrauch; berechent déi néideg Quantitéit u Reagenzien, an de Reaktiounssystem gëtt wéi an der folgender Tabelle virbereet:
| Komponenten | N Portioun (25µl System) |
| nCOV Primer TaqMan Probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR Reaktiounsléisung | 2 µl × N |
| *N = Zuel vun den geteste Proben + 1 (negativ Kontroll) + 1 (nCOVpositiv Kontroll) | |
2.2 Nodeems d'Komponenten grëndlech vermëscht goufen, zentrifugéiert d'Mëschung fir eng kuerz Zäit, fir datt all d'Flëssegkeet op der Réierwand op de Buedem vum Réier fale kann, an da gitt den 20 µl Amplifikatiounssystem an d'PCR-Réier aliquotéiert.
3 Proufnahme (Proufvirbereedungsberäich)
No der Extraktioun ginn 5 μl vun den negativen a positive Kontrollen derbäigesat. D'RNA vun der ze testener Prouf gëtt an d'PCR-Reaktiounsröhrchen bäigefüügt.
Maacht d'Röhrchen gutt zou a zentrifugéiert et e puer Sekonnen bei 8.000 rpm, ier et an den Amplifikatiounsdetektiounsberäich transferéiert gëtt.
4 PCR-Amplifikatioun (verstäerkten Detektiounsberäich)
4.1 Setzt d'Reaktiounsröhrchen an d'Proufzell vum Instrument a stellt d'Parameteren wéi follegt an:
| Bühn | Zyklus Zuel | Temperatur(°C) | Zäit | KollektiounSäit |
| RéckwärtsTranskriptioun | 1 | 42 | 10 Minutten | - |
| Virdenaturatiounn | 1 | 95 | 1 Minutt | - |
| Zyklus | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30er Joren | Datensammlung |
Auswiel vum Instrumentdetektiounskanal: Wielt de FAM, HEX, CY5 Kanal fir de Fluoreszenzsignal. Fir Referenzfluoreszenz NONE, wielt w.e.g. net ROX.
5 Resultatanalyse (Kuckt w.e.g. d'experimentell Instruktioune vun all Instrument fir d'Astellung)
Nom Reaktioun, späichert d'Resultater. Nom Analyse, passt den Ufankswäert, den Ennwäert an de Schwellwäert vun der Basislinn no dem Bild un (de Benotzer kann no der tatsächlecher Situatioun upassen, den Ufankswäert kann op 3~15 gesat ginn, den Ennwäert kann op 5~20 gesat ginn, Upassung) am logarithmesche Grafik. Um Schwellwäert vum Fënster ass d'Schwelllinn an der logarithmescher Phas, an d'Verstärkungskurve vun der negativer Kontroll ass eng riicht Linn oder ënner der Schwelllinn).
6 Qualitéitskontroll (Eng prozedural Kontroll ass am Test abegraff) Negativ Kontroll: Keng offensichtlech Verstärkungskurve fir FAM-, HEX-, CY5-Detektiounskanäl
COV positiv Kontroll: kloer Amplifikatiounskurve vun den FAM- an HEX-Detektiounskanäl, Ct-Wäert ≤32, awer keng Amplifikatiounskurve vum CY5-Kanal;
Déi uewe genannten Ufuerderunge mussen gläichzäiteg am selwechten Experiment erfëllt ginn; soss ass den Experiment ongëlteg a muss widderholl ginn.
7 Bestëmmung vun de Resultater.
7.1 Wann et keng Amplifikatiounskurve oder e Ct-Wäert > 40 an de FAM- an HEX-Kanäl vun der Testprouf gëtt, an et eng Amplifikatiounskurve am CY5-Kanal gëtt, kann een dovun ausgoen, datt keng 2019 New Coronavirus (2019-nCoV) RNA an der Prouf ass;
.2 Wann d'Testprouf kloer Amplifikatiounskurven an de FAM- an HEX-Kanäl huet, an de Ct-Wäert ≤40 ass, kann een dovun ausgoen, datt d'Prouf positiv fir den neie Coronavirus vun 2019 (2019-nCoV) ass.
7.3 Wann d'Testprouf nëmmen an engem Kanal vu FAM oder HEX eng kloer Amplifikatiounskurve huet, an de Ct-Wäert ≤40 ass, an et keng Amplifikatiounskurve am anere Kanal gëtt, mussen d'Resultater nei getest ginn. Wann d'Resultater vum neie Test konsequent sinn, kann d'Prouf als positiv fir déi nei beurteelt ginn.
Coronavirus 2019 (2019-nCoV). Wann d'Resultat vum Widdertest negativ ass, kann een dovun ausgoen, datt d'Prouf negativ fir den neie Coronavirus 2019 (2019-nCoV) ass.
Positiv Bewäertung
D'ROC-Kurvemethod gëtt benotzt fir de Referenz-CT-Wäert vum Kit ze bestëmmen an de Referenzwäert vun der interner Kontroll ass 40.
Interpretatioun vun den Testergebnisse
1. All Experiment soll op negativ a positiv Kontrollen getest ginn. Testergebnisse kënnen nëmme bestëmmt ginn, wa Kontrollen d'Qualitéitskontrollufuerderunge erfëllen.
2. Wann d'FAM- an HEX-Detektiounskanäl positiv sinn, kann d'Resultat vum CY5-Kanal (internen Kontrollkanal) wéinst Systemkonkurrenz negativ sinn.
3. Wann d'Resultat vun der interner Kontroll negativ ass, an d'FAM- an d'HEX-Detektiounskanäl vum Reagenzglieser och negativ sinn, heescht dat, datt de System deaktivéiert oder d'Operatioun falsch ass, an den Test ass ongëlteg. Dofir mussen d'Prouwe nei getest ginn.
