Produkter
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Detektioun Kit fir 2019-nCoV
Erwaart Notzung
Dëse Kit gëtt fir d'qualitativ Detektioun vum neie Coronavirus (2019-nCoV) benotzt mat Halsschwaben, Nasopharyngeal-Wäschen, Bronchoalveolar Lavage Flëssegkeet, Sputum. Beweiser fir klinesch Diagnostik a Behandlung.Eng ëmfaassend Analyse vun der Conditioun ass recommandéiert a Kombinatioun mat de klineschen Manifestatiounen vum Patient an aner Laboruntersuchungen.
Inspektiounsprinzip
De Kit baséiert op engem Schrëtt RT-PCR Technologie.Tatsächlech goufen den 2019 neie Coronavirus (2019-nCoV) ORF1ab an N Genen als Amplifikatiounszielregiounen ausgewielt.Spezifesch Primer a fluoreszent Sonden (N Gen Sonde si mat FAM gezeechent an ORF1ab Sonde si mat HEX markéiert) sinn entwéckelt fir 2019 nei Typ Coronavirus RNA a Proben z'entdecken.De Kit enthält och en endogenen internen Kontrollerkennungssystem (intern Kontrollgensonde markéiert mat CY5) fir de Prozess vun der Probesammlung, RNA a PCR Amplifikatioun ze iwwerwaachen, doduerch falsch negativ Resultater ze reduzéieren.
Haaptkomponenten
| Komponenten | Volumen（48T/Kit) |
| RT-PCR Reaktioun Léisung | 9 6ml |
| nCOV Primer TaqMan Probemixture (ORF1ab, N Gene, RNAseP Gene) | 8 64l |
| Negativ Kontroll | 1500 l |
| nCOV Positiv Kontroll（l ORF1ab N Gene） | 1500 l |
Eegent Reagenz: RNA Extraktioun oder Reinigungsreagenz.Negativ / positiv Kontroll: Déi positiv Kontroll ass RNA mat dem Zilfragment, während déi negativ Kontroll nukleinsäurefräi Waasser ass.Wärend der Benotzung solle se un der Extraktioun deelhuelen a sollen als infektiiv ugesi ginn.Si sollten am Aklang mat de relevante Reglementer gehandhabt an entsuergt ginn.
Den internen Referenzgen ass de mënschleche RnaseP Gen.
Stockage Konditiounen an Verfallsdatum
-20 ± 5 ℃, vermeit widderholl Afréiere an thawing méi wéi 5 Mol, valabel fir 6 Méint.
Applicabel Instrument
Mat FAM / HEX / CY5 an aner Multi-Channel fluorescent PCR Instrument.
Exemplar Ufuerderunge
1.Applicable Exemplar Zorte: Hals Swabs, nasopharyngeal Swabs, bronchoalveolar lavage Flëssegket, sputum.
2. Exemplarsammlung (aseptesch Technik)
Pharyngeal Swab: Wischt d'Mandelen an d'posterior Pharyngeal Mauer mat zwee Swabs zur selwechter Zäit, daucht de Swab Kapp an e Reagenzglas mat der Probe Léisung
Sputum: Nodeems de Patient en déif Hust huet, sammelt den Houschte Sputum an engem Schraubekapp-Reagenzglas mat der Probe-Léisung;Bronchoalveolar Lavage Flëssegkeet: Probe vu medizinesche Fachleit.3.Storage an Transport vu Proben
Exemplare fir Virusisolatioun an RNA Tester solle sou séier wéi méiglech getest ginn.Exemplare, déi bannent 24 Stonnen erkannt kënne ginn, kënne bei 4 ℃ gespäichert ginn;déi, déi net bannent 24 festgestallt kënne ginn
Stonnen solle bei -70 ℃ oder ënner gelagert ginn (wann et kee Späicherkonditioun vun -70 ℃ ass, sollten se
temporär am -20 ℃ Frigo gespäichert).Exemplairen solle widderholl Afréiere a Verdauen wärend dem Transport vermeiden.Exemplare solle sou séier wéi méiglech no der Sammlung an de Labo geschéckt ginn.Wann Proben iwwer laang Distanzen transportéiert musse ginn, gëtt dréchen Äislagerung recommandéiert.
Test Methoden
1 Probeveraarbechtung an RNA Extraktioun (Probeveraarbechtungsberäich)
Et ass recommandéiert 200μl flësseg Probe fir RNA Extraktioun ze huelen.Fir verwandte Extraktiounsschrëtt, kuckt d'Instruktioune vu kommerziellen RNA Extraktiounskits.Souwuel déi negativ wéi negativ
Kontrollen an dësem Kit waren an der Extraktioun involvéiert.
2 PCR Reagens Virbereedung (Reagens Virbereedung Beräich)
2.1 Ewechzehuelen all Komponente aus dem Kit an thaw an Mix bei Raumtemperatur.Zentrifuge bei 8.000 RPM fir e puer Sekonnen virum Gebrauch;berechent déi erfuerderlech Quantitéit u Reagenz, an de Reaktiounssystem gëtt virbereet wéi an der folgender Tabell gewisen:
| Komponenten | N Portioun (25 µl System) |
| nCOV Primer TaqMan Probemixture | 18 µl × N |
| RT-PCR Reaktioun Léisung | 2 µl × N |
| *N = Unzuel vun de Proben getest + 1 (negativ Kontroll) + 1 (nCOVpositiv Kontroll) | |
2.2 No grëndlech Vermëschung vun de Komponente, Zentrifuge fir eng kuerz Zäit fir all d'Flëssegkeet op der Rouermauer op de Buedem vum Rouer ze falen, an dann den 20 µl Amplifikatiounssystem an d'PCR-Röhre aliquot.
3 Sampling (Prouf Virbereedung Beräich)
Füügt 5μl vun den negativen a positiven Kontrollen no der Extraktioun.D'RNA vun der Probe fir ze testen gëtt an de PCR Reaktiounsröhre bäigefüügt.
Deckt d'Tube fest an centrifugéiert bei 8.000 rpm fir e puer Sekonnen ier se an d'Verstärkungserkennungsberäich transferéiert gëtt.
4 PCR Amplifikatioun (amplifizéiert Detektiounsberäich)
4.1 Setzt d'Reaktiounsröhre an d'Probezelle vum Instrument, a setzen d'Parameteren wéi follegt:
| Etapp | Zyklus Zuel | Temperatur(°C) | Zäit | KollektiounSite |
| ËmgekéiertTranskriptioun | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-Denaturatiounn | 1 | 95 | 1 min | - |
| Zyklus | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | Datensammlung |
Instrumenterkennungskanalauswiel: Wielt de FAM, HEX, CY5 Kanal fir de Fluoreszenzsignal.Fir Referenz fluorescent KENG, wielt weg net ROX.
5 Resultat Analyse (kuckt w.e.g. op d'experimentell Instruktioune vun all Instrument fir Astellung)
No der Reaktioun späichert d'Resultater.No der Analyse, passt den Startwäert, d'Ennwäert an d'Schwellwäert vun der Baseline no dem Bild un (de Benotzer kann no der aktueller Situatioun upassen, de Startwäert kann op 3 ~ 15 gesat ginn, den Ennwäert kann op gesat ginn 5 ~ 20, Upassung) an der logarithmescher Grafik Op der Schwell vun der Fënster ass d'Schwelllinn an der logarithmescher Phase, an d'Verstärkungskurve vun der negativer Kontroll ass eng riicht Linn oder ënner der Schwelllinn).
6 Quauty Kontroll (Eng prozedural Kontroll ass am Test abegraff) Negativ Kontroll: Keng offensichtlech Amplifikatiounskurve fir FAM, HEX, CY5 Detektiounskanäl
COV positiv Kontroll: offensichtlech Amplifikatiounskurve vu FAM an HEX Detektiounskanäl, Ct Wäert≤32, awer keng Amplifikatiounskurve vum CY5 Kanal;
Déi uewe genannte Ufuerderunge mussen gläichzäiteg am selwechte Experiment erfëllt ginn;soss ass d'Experiment ongëlteg a muss widderholl ginn.
7 Bestëmmung vun Resultater.
7.1 Wann et keng Amplifikatiounskurve oder Ct Wäert> 40 an de FAM an HEX Kanäl vun der Testprobe gëtt, an et gëtt eng Amplifikatiounskurve am CY5 Kanal, kann et beurteelt ginn datt et keen 2019 neie Coronavirus (2019-nCoV) gëtt. RNA an der Probe;
.2 Wann d'Testprobe offensichtlech Amplifikatiounskurven an de FAM- an HEX-Kanäl huet, an de Ct-Wäert ≤40 ass, kann et beurteelt ginn datt d'Probe positiv ass fir den 2019 neie Coronavirus (2019-nCoV).
7.3 Wann d'Testprobe eng kloer Amplifikatiounskurve nëmmen an engem Kanal vu FAM oder HEX huet, an de Ct-Wäert ≤40 ass, an et gëtt keng Amplifikatiounskurve am anere Kanal, mussen d'Resultater nei gepréift ginn.Wann d'Retestresultater konsequent sinn, kann d'Probe als positiv beurteelt ginn fir déi nei
Coronavirus 2019 (2019-nCoV).Wann d'Retestresultat negativ ass, kann et beurteelt ginn datt d'Probe negativ ass fir 2019 neie Coronavirus (2019-nCoV).
Positiv Uerteel Wäert
D'ROC Curve Method gëtt benotzt fir de Referenz CT Wäert vum Kit ze bestëmmen an den internen Kontroll Referenz Wäert ass 40.
Interpretatioun vun Testresultater
1.All Experiment soll fir negativ a positiv Kontrollen getest ginn.Testresultater kënnen nëmme bestëmmt ginn wann d'Kontrollen d'Qualitéitskontrollfuerderunge entspriechen
2.Wann d'FAM- an HEX-Detektiounskanäl positiv sinn, kann d'Resultat vum CY5-Kanal (intern Kontrollkanal) negativ sinn wéinst der Systemkonkurrenz.
3.Wann d'intern Kontrollresultat negativ ass, wann d'FAM- an HEX-Detektiounskanäl vum Reagenzglieser och negativ sinn, heescht et datt de System deaktivéiert ass oder d'Operatioun falsch ass, t den Test ass ongëlteg.Dofir mussen d'Proben nei getest ginn.
